基孔肯雅热试剂

基孔肯雅热试剂说明书  

【预期用途】  

基孔肯雅IgM抗体ELISA检测试剂盒主要用于定性检测人血清和血浆中抗基孔肯雅病毒的IgM抗体。  

【实验原理】  

此试剂盒基于ELISA技术。包被板中包被了抗人IgM抗体，如果人血清或血浆中含有IgM时，则会与其特异性结合，洗板将未结合的物质洗去，然后加入基孔肯雅抗原溶液，洗板洗去未结合的物质，然后加入链霉亲和素和基孔肯雅抗体酶联物。洗板后，加入TMB底物液，颜色变成蓝色，加入终止液终止反应，颜色由蓝色转为黄色，zui后用酶标仪在450nm处读数。  

【试剂组成】  

包被板：12×8可拆卸，包被了抗人IgM抗体，密封在可重封铝箔袋中  

基孔肯雅溶液1：1瓶包含6mL的基孔肯雅抗原溶液，即用，白盖  

基孔肯雅溶液2：1瓶包含6mL的生物素化的基孔肯雅抗体，即用，蓝色，白盖  

基孔肯雅IgM阳性质控：1瓶，1.5mL，黄色，即用，红盖  

基孔肯雅IgM临界质控：1瓶，2mL，黄色，即用，绿盖  

基孔肯雅IgM阴性质控：1瓶，1.5mL，黄色，即用，蓝盖  

样本稀释液：1瓶包含100mL的即用缓冲液，用于稀释样本，pH7.2±0.2，黄色，白盖  

洗涤液：1瓶，包含50mL20倍浓缩的缓冲液，（pH7.2±0.2）用于洗板，白盖  

链霉亲和素结合液：1瓶包含6mL过氧化物酶结合的链霉亲和素，即用，红色，黑盖  

TMB底物液：1瓶包含15mLTMB，即用，黄盖  

终止液：1瓶包含15mL，即用，内含硫酸，0.2mol/l，红盖  

【需要的设备和材料】  

固定板  

封板片  

酶标仪（450/620nm）  

37℃孵箱  

洗瓶或自动洗板机  

10~1000μL的移液器  

漩涡混匀器  

蒸馏水或去离子水  

一次性试管  

计时器  

【储存和稳定性】  

试剂在有效期内，储存于2-8℃稳定  

【试剂准备】  

洗涤液的准备  

用双蒸水稀释洗涤液，例子：10ml洗涤液+190ml双蒸水。稀释好的洗涤液在室温下5天内有效。  

【样本的采集和准备】  

这个实验中使用的样本是人血清和血浆，如果实验在样本采集后的5天内进行，则需要储存在2-8℃，否则，必须于-20℃到-70℃深度冻存。如果样本是深度冻存的，在使用前，则需要充分混匀，避免反复冻融。  

不推荐使用热灭活的样本  

【样本的稀释】  

将10μL样本跟1ml的样本稀释液混匀，并用漩涡混匀器充分混匀。  

【实验步骤】  

在开始试验前，请仔细阅读试验说明。结果的可信度是依赖于严格地按照实验说明来进行的，铺板时zui少留1个孔为空白对照（A1）1个阴性质控孔（B1）2个临界质控孔（C1+D1）1个阳性质控孔（E1）。开始试验前，请将所有试剂都平衡到室温  

1.吸取50μL的质控品和稀释过的样本到相应的孔中，留A1孔做空白对照孔  

2.封板  

3.在37±1℃下孵育1小时±5分钟  

4.当孵育完成时，揭去封板片，弃去反应液，每孔300μL洗涤液，洗板3次，避免溢出。每孔浸泡的时间都必须＞5秒，zui后拍板将残留的液滴都拍去。  

5.吸取50μL基孔肯雅溶液1到除了空白对照孔的每个孔中，盖板  

6.在室温孵育30分钟  

7.重复步骤4  

8.将基孔肯雅溶液2跟链霉亲和素结合物混匀10分钟  

9.吸取50μL基孔肯雅溶液2跟链霉亲和素的复合物到除了空白对照孔的每个孔中，盖板。  

10.室温孵育30分钟  

11.重复步骤4  

12.吸取100μLTMB底物液到每个孔中  

13.避光孵育15分钟（精确）  

14.加入100μL终止液到每个孔中，与加TMB底物液时的间隔和顺序都必须一样  

15.用酶标仪在加入终止液后30分钟内与450/620nm处检测  

【检测】  

调整酶标仪，以空白对照孔调零，以450nm处检测所有孔的吸光度值。  

【结果】  

1.检测生效的条件  

只有以下条件符合，检测的结果才能认为的有效的  

空白对照孔吸光度值＜0.100  

阴性质控孔吸光度值＜临界质控  

临界质控孔吸光度值0.150-1.300  

阳性质控孔吸光度值＞临界质控  

如果以上条件不符合的，那么试验结果则是无效的，需要重新检测  

2.结果的计算  

临界质控平均吸光度值的计算，例子：吸光度1：0.39；吸光度2：0.37  

（0.39+0.37）/2=0.38  

平均吸光度值为0.38  

3.结果的说明  

样本如果是比临界值高出10%，则认定为阳性，  

样本如果是在临界值上下10%之内，则认定为灰色区（推荐在2-4周之后再次检测新鲜的样本，如果样本仍然是灰色区，可以直接认为是阴性）  

样本如果是比临界值低出10%，则认定为阴性  

4.结果的单位  

病人样本平均吸光度值×10=U  

临界值  

例子：1.216×10=32U  

0.38  

临界值：10U  

灰色区：9-11U  

阴性：＜9U  

阳性：＞11U  

本译文由广州健仑生物科技有限和公司编译仅供参考，详情请以原文为准。  

http://www.jianlun45.com/jianlun-SonList-1502393/   

http://www.chem17.com/st199246/product_13673375.html