本组蛋白提取试剂盒是由一套完整的优化buffer和试剂组成,用于从哺乳动物细胞或组织中提取总组蛋白(H2A、H2B、H3和H4),整个流程可在80min内完成,且可保持组蛋白提取物中的翻译后修饰(PTM)完整性,因此提取物可用于各种翻译后修饰检测及应用,包括组蛋白甲基化、乙酰化、磷酸化、泛素化、SUMO化和ADP-核糖基化作用研究。
包装清单:
产品名称 50次 100次 储存条件
LysisBuffer1 50ml 100ml 室温
LysisBuffer2 10ml 20ml 室温
BalanceBuffer 2ml 4ml 室温
AdjustBuffer 200μl 300μl -20℃
组蛋白提取试剂盒产品特点:
1.所提取组蛋白可保留所有相关翻译后修饰,包括甲基化、乙酰化、磷酸化、泛素化、SUMO化、ADP-核糖基化以及Neddylation等。
2.建议每次从108个细胞/0.1g组织中提取组蛋白样品。
3.整个实验流程约需80min。
4.无需超速离心。
操作步骤:
A:组织中提取
1.收集0.1g组织,加入1.0mlLysisBuffer1及适量蛋白酶抑制剂(依据实验选择),冰上用组织研磨器或匀浆管研磨。
2.将匀浆后样品转移至1.5ml离心管中,11000rpm5min,吸弃上清保留沉淀。
3.至步骤2。
B:细胞中提取
1.收集约108个细胞,3000rpm5min(悬浮细胞直接离心,贴壁细胞使用细胞刮刀或胰蛋白酶消化离心收集均可。注意用预冷PBS清洗残留培养基和胰蛋白酶等),吸弃上清。
2.至步骤1。
步骤1:加1.0mlLysisBuffer1及适量蛋白酶抑制剂(依据实验选择),冰上孵育30min(每10min用移液枪吹打一次),4°C11000rpm离心5min,弃上清。
步骤2:于上述步骤离心管中加入200μlLysisBuffer2,置于冰上30min(每10min涡旋一次),4°C11000rpm离心5min,吸取上清于一新离心管中。
步骤3:加入40μlBalanceBuffer于上述步骤离心管中,用移液枪轻轻吹匀。
步骤4:使用BCA定量试剂盒定量。
步骤5:于步骤3离心管中加入2.4μlAdjustBuffer,轻轻吹匀,并应用于下游研究。
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