Elisa实验类型试剂的选择

酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked Immunosorbent Assay, ELISA) 技术从1970年代发展至今已近半个世纪，是一项实验室最基本的免疫检测技术，被广泛的应用于基础研究和临床检验。那么面对市面上数以千计的试剂盒，数百家供应商，对于刚进入实验室的新手或者准备开展ELISA实验的人员， 又该如何选择最适合且质量又可靠的ELISA试剂盒呢？

1. 首先选定ELISA类型

ELISA技术可用于测定抗原，也可用于测定抗体。牛ELISA检测试剂盒 ELISA方法中有三个必要的试剂：(1) 固相的抗原或抗体，即"免疫吸附剂"（immunosorbent）；(2) 酶标记的抗原或抗体，称为"结合物"（conjugate）；(3) 酶反应的底物。

一般可将ELISA分为以下几种类型，实验君首先需要根据自己的待检物来确定试剂盒类型。

1)    双抗体夹心法：针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单克隆抗体分别作为固相捕获抗体和酶标检测抗体。适用于测定二价或二价以上的大分子抗原如血浆中的细胞因子，不适用于测定半抗原及小分子单价抗原。同理，也有双抗原夹心法测抗体。

2)    直接法：将抗原直接固定在固相载体上，加入酶标记的一抗，即可测定抗原总量。此法操作手续简短，因无须使用二抗可避免交互反应。

3)    间接法：间接法是检测抗体常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体（抗人免疫球蛋白抗体）来检测与固相抗原结合的待检抗体。

4)    竞争法：小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点，因此不能用双抗体夹心法进行测定，可以采用竞争法模式。当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体。

2. 根据实验物种及待检样品性质来选择ELISA

如果实验君的实验样品为人、小鼠或大鼠样品，那么要选择一个合适的试剂盒相对容易，但如果您的实验样品来源于其他物种如鸡、牛、猴等，则市面上能提供的试剂盒种类却很少。且不可轻信能提供近万种试剂盒，覆盖多物种的供应商。但如果又非要检测这些物种的指标时，最好要对待检物(如有种属差异性)进行同源性分析以及试剂盒的种属交叉反应数据。对于样品类型而言，一般的商业化试剂盒都经过血清、血浆和细胞培养上清液的验证。在选择试剂盒时，最好要详细阅读说明书，比如血浆样本抗凝剂的使用是否与试剂盒兼容。另外，在某些情形下样品中会存在干扰因素比如溶血血浆、高脂肪含量的样品、人抗鼠抗体(HAMA)、细胞培养上清中含胎牛血清等。因此需根据样品来选择试剂盒，必要时还要根据样本来适当优化。或在样品收集前，最好先阅读一些可靠供应商试剂盒的说明书或直接咨询。如果您的样品为组织或细胞裂解物，则需要更谨慎的选择试剂盒。市面上大多数的商业化试剂盒没有经过多种来源组织样本的验证。这需要实验君能理解不是所有试剂盒所用的抗体对，都能特异的从一堆裂解物蛋白中特异检出您的目的蛋白，还要考虑组织样品的基质效应(Matrix Effect)等。

3. 根据样品中检测物水平来选择试剂盒

如果实验君对于样品中待检物的水平没有任何可参考的数据，最好选择宽动力学检测范围的试剂盒。如果样品中待检物的含量很低，建议选择高灵敏度的试剂盒。为了降低基质效应，有必要用稀释液至少做2倍稀释。如果样品中待检物含量远超过试剂盒的检测范围（标曲范围）， 也需做适当的倍数稀释。在最后计算结果时，需乘以相应的稀释倍数。

4. 根据样本可获得性来选择试剂盒

通常而言，商业化试剂盒的样品用量都在50ul或100ul, 但也有一些供应商的试剂盒对样品的用量要求可少至10ul。如果您的样品很珍贵或较难获取，则需要认真考虑试剂盒对样品用量的要求。如果样品量少，且要做多因子检测时更需谨慎。

5. 细致比较试剂盒关键性技术参数

ELISA试剂盒的关键技术参数包括板内差异性、板间差异性、批间差异性、重复性、特异性及交叉反应性、回收率等。如果实验君经常开展ELISA实验，建议使用同一厂家的试剂盒，这样可尽量保证数据的重复性(当然前提是实验条件的一致性)。对于科研用的定量ELISA试剂盒，不同的生产厂家使用的抗体对、酶以及底物、生产工艺和研发实力不尽相同，自然不同厂家试剂盒测出的数据会有差异。